万寿竹炮制 万寿竹化学成分及抗炎活性研究及化合物的结构鉴定
前言
万寿竹属（Disporum Salisb.）目前发现有 20 种左右，主要分布于北美、喜马拉雅地区、马来西亚、印度尼西亚爪哇、日本和中国。其中我国有 10 种，云南就有 8 种[2,3]。万寿竹，又名百尾参、白龙须、竹叶参、竹叶七，为苗族地区习用药材，主产于西南地区，全国各地均有分布，生长于海拔 700-3000 m 的灌木丛中或林下。
其性凉、味苦，具有清肺化痰，止咳，健脾消食，舒筋活血。向内用于肺结核咳嗽，食欲不振，胸腹胀满，筋骨疼痛，腰腿痛；外用用于治烧伤，骨折[4]。本文对近年来万寿竹属植物的化学成分和生物活性的研究进行系统性的总结，为继续研究其化学成分，明确其药理作用奠定理论基础。
万寿竹属植物的化学成分
目前报道的万寿竹属植物的化学成分主要有黄酮及黄酮苷类，甾体及其苷类，挥发油类。
- 黄酮及黄酮苷类
黄酮类化合物是一类具有 2-******色原酮结构的化合物。其分子中有一个酮式羰基，同时由于其羟基衍生物多具黄色，故又被称黄碱素或黄酮。黄酮类化合物在植物体中通常与糖相连以黄酮苷类存在，只有小部分以游离态的形式存在[5]。目前对黄酮类化合物研究甚广，万寿竹属以黄酮及其黄酮苷类化合物为主。
2、甾体及甾体皂苷类
甾体类化合物是一类具有环戊烷骈多氢菲甾体母核的天然化学成分。甾体皂苷是一类螺甾烷类化合物衍生的寡聚糖，甾体皂苷大多存在于单子叶植物百合科、石蒜科和薯蓣科等植物[8]。万寿竹属中首次分离到甾体皂苷及豆甾醇、谷甾醇类、 麦角甾醇类和胡萝卜苷类。
3、挥发油类
吴文利等[11]采用蒸馏萃取法对百尾参中挥发油进行提取，并进行 GC-MS 分析，利用计算机检索，共鉴定了 63 个挥发油类化合物，
4、其他类化合物
Cho 等[12]在万寿竹属植物中发现 6 个由*********类化合物和苯乙醇类化合物缩合成的*********苄酯类化合物。
在万寿竹属植物中发现 5 个木脂素类化合物：( )-cedrusin (1)，( )-dihydrodehy drodiconiferyl alcohol-9-O-β-D-glucopyranoside(2)，(7S,8S)- 4,9,9′ -trihydroxy-3′-methoxy-8-O-4′-neolignan-7-O-β-D-glucopyranoside (3)，(-)-9′-hydroxypinoresinol (4) 和(-)-8-hydroxypinoresinol-8-O-β-D-glucopyranoside (5)。
在万寿竹属植物百尾参中发现 10 个含氮类化合物：2-******琥珀酰胺（1），4-methylene-5-oxopyrrolidine-2-carboxylic acid（2），胸腺嘧啶（3）， 马来酸酰亚胺-5-肟（4），腺嘌呤（5），腺苷（6），鸟嘌呤核苷（7）, 5′-deoxy- 5′-methylamino-adenosine（8），核黄素（9），1-核糖醇基-2,3-二酮-1,2,3,4-四氢-6,7-二******-喹喔啉（10）。
万寿竹属的生物活性
1、止咳祛痰作用
任朝晖等[15]采用小鼠氨水引咳法和小鼠酚红排泄法观察发现，万寿竹的不同的提取部位中乙酸乙酯提取物、******提取物和水提取物均有明显的镇咳药效作用，且剂量与镇咳作用呈正相关。马莹等[16]证明百尾参止咳的有效部位集中在乙酸乙酯层，祛痰的有效部位集中在水层和乙酸乙酯层，且高剂量组祛痰效果更明显。甘秀海等[17]提取分离万寿竹中的化合物，并对所得的化合物进行止咳活性实验，发现化合物 obtucarbamate A 、 obtucarbamate B 和 dimethyl {[carbonylbis(azanediyl)] bis( 2-methyl-5,1-phenylene)}dicarbamate 均具有较好的止咳作用。
2、抑菌作用
江滟等[18]通过研究发现宝铎草的提取物，除水层外，其他部位均对金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌作用。即 95%乙醇总提物和 95%洗脱部分对金黄色葡萄球菌具有杀菌作用。水洗脱部分对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌均有一定抑菌作用。
且宝铎草的某些提取物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌也具有抑菌作用。甘秀海等[19]研究万寿竹抑菌活性表明万寿竹提取物中只有乙酸乙酯萃取物对 6 种菌种中的枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有抑制作用，并同时推测其抑菌能力可能是由于该部位含有香草酸、水杨酸等芳香酸及黄酮类化合物。
3、镇痛抗炎
张松[20]为了研究白龙须的镇痛作用，对小鼠利用热板法和扭体法两种方法进行实验。通过实验发现白龙须无论是对物理还是化学性致痛因子所致疼痛均有明显的镇痛作用，其镇痛作用与给药的剂量呈正相关。同时张松[21]对小鼠耳廓使用二甲苯导致其肿胀，又用醋酸改变小鼠腹腔毛细血管。结果显示白龙须药材剂量的高低将直接抑制小鼠耳廓的肿胀程度和腹腔毛细血管通透性，且抑制强度与剂量也呈正相关。
4、抗氧化
曹剑锋等[22]研究发现百尾参多糖对羟自由基和DPPH自由基都有一定的清除能力，且具有一定的还原力和较强的金属螯合能力，表明百尾参多糖具有较好的抗氧化活性。赵慧玲[14]在进行百尾参不同极性洗脱部位清除DPPH自由基和ABTS自由基能力的实验中发现百尾参30%乙醇洗脱部位和60%乙醇洗脱部位的抗氧化能力较好，表明百尾参中等极性部位有较好的抗氧化活性。
5、治疗神经退行性疾病
Cho 等[13]研究发现，宝珠草叶子中的木脂素(-)-9′-hydroxy- pinoresinol能够减轻炎症引起的神经退行性疾病。实验证明可能是由于该木质素具有呋喃环骨架，能够抑制诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶-2（COX-2）的表达，从而来抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路，进而抑制一氧化氮的释放，抑制BV2小胶质细胞的激活，从而达到治疗炎症引起的神经退行性疾病的效果。
6、抗光老化
Mohamed Antar Aziz Mohamed 等[23]通过实验表明宝铎草的提取物对人类皮肤因对紫外线诱导的光老化作用具有保护作用。实验证明是由于宝铎草提取物能够抑制HaCaT细胞由紫外线照射诱导的基质胶原酶的表达，同时还能抑制紫外线照射诱导磷酸化MAPKs，激活NF-κB/p65和IKKα，以及IκBα的降解和磷酸化，同时达到保护紫外线诱导的光老化作用。
小结与展望
综上所述，有关百尾参化学成分和药理作用的研究到目前为止越来越深入， 并取得了一定的研究成果，但是目前已经报道的百尾参的化学成分仍然较少且不够系统，故有必要对百尾参化学成分进行进一步研究，另外，万寿竹属植物的药理活性仍然不够具体，其药理活性的机理也不够明确。故本实验将阐明万寿竹属百尾参的药理作用物质基础和作用机理。
化合物的结构鉴定
1、2′-β-D-glucopyranosyloxybenzyl-6-α-L-(4′-O-acetyl)-rhamnopyranosyloxy-2-
hydroxy-3-methoxybenzoate（C-3）
该化合物为白色粉末，HR-ESI-MS m/z：639.1970 [M-H]- ，结合 1 H-NMR 和13C-NMR 谱推断其该化合物分子式为 C29H36O16，其 1 H-NMR（见表 1-2）显示结构中存在两个苯环, 其中一个是由存在两个邻位芳香族质子[δH 6.97 (1H, d, J =9.0 Hz, H-4) and 6.61 (1H, d, J = 9.0 Hz, H-5)]的四取代苯环。另外一个是存在四个芳香族质子[δH 7.38 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-6′)，7.30 (1H, t, J = 8.5 Hz, H-4′)，7.16(1H, d, J = 8.5 Hz, H-3′) and 7.05 (1H, t, J = 7.4 Hz, H-5′)]的邻位取代苯环，结构中存在两个糖[δH 5.36 (1H, s, H-Rha-1) and 4.88 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-Glu-1)]，结构中存在一个乙酰基[δH 2.02 (1H, s, H-6′), OAc-2′′]。
其 13C-NMR（见表 1-2），结构中存在两个酯羰基[δC 170.5 (COCH3-1′′）and 169.5 (C-7)]、一个氧化亚****** δC 61.9（C-7′）、一个甲氧基 δC 56.9（OMe）、两个糖端基碳信号[δC 101.4 (C-Glu-1) and 99.0 (C-Rha-1)]和一个乙酰基碳信号 δC 21.4（COCH3-2′′）。由此可知该化合物属
于*********苄酯类化合物。其母核结构与相关文献[12]相同。HMBC 谱相关（δH4.84/δC 21.4）显示乙酰基是连在鼠李糖的 4 位羟基上，（δH 5.36/δC 146.9）显示鼠李糖是连在母核的 6 位，（δH 4.88/δC 154.9）显示葡萄糖是连在母核的 2′位，（δH 5.37/δC 154.9）和（δH 7.38/δC 61.9）显示氧化亚******是连在母核的 1′位，（δH 3.78/δC 143.5）显示******是连在母核的 3 位。并结合参考文献[12,25]确定两个糖的构型为 β-D-葡萄糖和 α-L-鼠李糖。根据以上信息，故鉴定化合物 C-3 为 2′-β-Dglucopyranosyloxybenzyl-6-α-L-(4′-O-acetyl)-rhamnopyranosyloxy-2-hydroxy-3-methoxybenzoate。
2、2′-β-D-glucopyranosyloxybenzyl-6-α-L-(4′-O-acetyl)-rhamnopyranosyloxy-2-
hydroxy-3-methoxybenzoate（C-3）
该化合物为白色粉末，HR-ESI-MS m/z：639.1970 [M-H]- ，结合 1 H-NMR 和13C-NMR 谱推断其该化合物分子式为 C29H36O16，其 1 H-NMR（见表 1-2）显示结构中存在两个苯环, 其中一个是由存在两个邻位芳香族质子[δH 6.97 (1H, d, J =9.0 Hz, H-4) and 6.61 (1H, d, J = 9.0 Hz, H-5)]的四取代苯环。另外一个是存在四个芳香族质子[δH 7.38 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-6′)，7.30 (1H, t, J = 8.5 Hz, H-4′)，7.16(1H, d, J = 8.5 Hz, H-3′) and 7.05 (1H, t, J = 7.4 Hz, H-5′)]的邻位取代苯环，结构中存在两个糖[δH 5.36 (1H, s, H-Rha-1) and 4.88 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-Glu-1)]，结构中存在一个乙酰基[δH 2.02 (1H, s, H-6′), OAc-2′′]。
其 13C-NMR（见表 1-2），结构中存在两个酯羰基[δC 170.5 (COCH3-1′′）and 169.5 (C-7)]、一个氧化亚****** δC 61.9（C-7′）、一个甲氧基 δC 56.9（OMe）、两个糖端基碳信号[δC 101.4 (C-Glu-1) and99.0 (C-Rha-1)]和一个乙酰基碳信号 δC 21.4（COCH3-2′′）。由此可知该化合物属
于*********苄酯类化合物。其母核结构与相关文献[12]相同。
HMBC 谱相关（δH4.84/δC 21.4）显示乙酰基是连在鼠李糖的 4 位羟基上，（δH 5.36/δC 146.9）显示鼠李糖是连在母核的 6 位，（δH 4.88/δC 154.9）显示葡萄糖是连在母核的 2′位，（δH 5.37/δC 154.9）和（δH 7.38/δC 61.9）显示氧化亚******是连在母核的 1′位，（δH 3.78/δC 143.5）显示******是连在母核的 3 位。并结合参考文献[12,25]确定两个糖的构型为 β-D-葡萄糖和 α-L-鼠李糖。根据以上信息，故鉴定化合物 C-3 为2′-β-Dglucopyranosyloxybenzyl-6-α-L-(4′-O-acetyl)-rhamnopyranosyloxy-2-hydroxy-3-methoxybenzoate。